روش کار کیت ویتامین D

روش کار کیت ویتامین D
96تستی
در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد ذخیره شود
آماده سازی محلول ها :
محلول کار ویتامین D بیوتینه : 1 حجم ویتامین D بیوتینه را با 51 حجم از رقیق کننده بیوتین مخلوط کنید .
(1/0 میلی لیتر از ویتامین D بیوتینه با 5 میلی لیتر از رقیق کننده)
بافر شستشو : محتویات محلول شستشو را با 600 میلی لیتر آب مقطر یا آب دیونیزه در یک ظرف مناسب رقیق کنید .
بافر رقیق شده را می توان تا 60 روز در دمای اتاق (20 تا 27 درجه سانتیگراد ) ذخیره نمود .
نکته : اگر محلول سوبسترا آبی رنگ شد از آن استفاده نکنید .
مراحل انجام آزمایش :
1 - 10 میکرولیتر از نمونه های استاندارد ، کنترل و بیمار را به داخل چاهک مورد نظر بریزید .
2 – 200 میکرولیتر از محلول کار ویتامین D بیوتینه به داخل کلیه چاهک ها اضافه شود .
3 – چاهک ها را با استفاده از shaker پلیت به مدت 20 ثانیه در 200-400 rpm تکان داده و مخلوط کنید .
4 – به مدت 90 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید .
5 – محتویات میکروپلیت را به وسیله آسپیره کردن دورریخته و بوسیله کاغذ جاذب پلیت را خشک کنید .
6 - چاهک ها را 3 مرتبه و هر مرتبه با 300 میکرولیتر محلول شستشو بشویید . در هربار شستشو اجازه دهید محلول شستشو 5 تا
10 ثانیه مانده و سپس دور ریخته شود . در انتها شستشو به وسیله کاغذ جاذب باقیمانده محلول شستشو را خشک نمایید .
7 – 200 میکرولیتر از معرف آنزیمی ویتامین D به داخل کلیه چاهک ها اضافه شود .
8 – چاهک ها را به مدت 30دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید .
9 – چاهک ها را 3 مرتبه و هر مرتبه با 300 میکرولیتر محلول شستشو بشویید . در هربار شستشو اجازه دهید محلول شستشو 5 تا
10 ثانیه مانده و سپس دور ریخته شود . در انتهای شستشو به وسیله کاغذ جاذب باقیمانده محلول شستشو را خشک نمایید .
10 – مقدار 200 میکرولیتر محلول سوبسترا درون تمام چاهک بریزید . برای به حداقل رساندن تفاوت زمان . واکنش بین چاهک
ها معرف را به ترتیب زمانی مشابه اضافه کنید .
11 - چاهک ها را به مدت 30دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید .
12 – مقدار 50 میکرولیتر محلول متوقف کننده را درون تمام چاهک ها بریزید و به آرامی برای 15 تا 20ثانیه تکان دهید تا مخلوط شود .برای به
حداقل رساندن تفاوت زمان واکنش بین چاهک ها معرف ها را به ترتیب زمانی مشابه اضافه کنید.
13 – مقدار جذب نوری را برای هر چاهک در طول موج 450 نانومتر ( با استفاده از طول موج مرجع 630-620 نانومتر برای کاهش دادن نقص
چاهک ها ) با استفاده از دستگاه خوانشگر بخوانید . جذب نوری چاهک ها باید تا 10 دقیقه بعد از اضافه کردن محلول متوقف کننده خوانده شود .